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      慢病毒包裝服務中如何進行預實驗
      點擊次數：433 發布時間：2022-07-15
       　　慢病毒是一種有包膜的RNA病毒，直徑為80-120nm，呈二十面體對稱結構、球形。病毒顆粒最外層是包膜，再往里依次為基質蛋白和衣殼，最里面是兩條相同的正股RNA鏈和酶。慢病毒包裝服務是將客戶的目的基因的cDNA序列連接到不同的慢病毒載體上，通過包裝獲得過表達目的基因的慢病毒顆粒。為了節省病毒，推薦使用96孔板進行預實驗。操作步驟如下：
       
      　?、俚谝惶旒毎臏蕚?/div>
       
      　　將目的細胞接種于96孔板中，細胞融合率為50%為最佳。為保證細胞生長良好，請保證細胞貼壁過夜。
       
      　?、诘诙觳《镜南♂?/div>
       
      　　取10μL慢病毒原液加入90μL培養液中做1:10稀釋（10-1），以此為起點做梯度稀釋直至稀釋10-7?？筛鶕嶋H情況降低或提高稀釋倍數。
       
      　?、鄣诙旄腥灸康募毎?/div>
       
      　　取出提前準備好的96孔板，用準備好的病毒稀釋液替代舊培養液，注意保留未加入病毒的細胞孔作為對照組。
       
      　?、艿诙潦煊^察熒光或檢測
       
      　　慢病毒對細胞的感染較慢，請在感染細胞后48、72、96、120小時分別觀察細胞中熒光表達情況（如果您選擇的產品不帶有熒光標簽，請在48、72、96、120小時分別收獲細胞并通過Western-Blot或其他檢測手段來檢測基因表達）。
       
      　　注意：
       
      　　由于不同細胞對慢病毒感染過程的承受能力不同，在加入病毒稀釋液后，請于12-24小時后觀察細胞狀態以確認加入的病毒量是否合適。
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